rtpcr probe

Probe-based qPCR RT-qPCR | NEB Probe-based quantitative PCR (qPCR) atau RT-qPCR menggunakan fluoresensi real-time dari penghancuran eksonuklease dari probe berlabel fluoresens, yang spesifik pada target untuk mengukur amplifikasi DNA pada setiap siklus PCR. Kit Assay Ekspresi Gen TaqMan® didasarkan pada polimerase nuklease 5 ', yang menggunakan probe fluorigenik untuk mendeteksi produk PCR yang spesifik saat bertambah selama PCR. Sebuah probe TaqMan dengan label pewarna FAM™ atau VIC™ pada ujung 5 ', dan pengikat lekukan minor (MGB) dan penyaring nonfluoresens (NFQ) pada ujung 3 '. PCR-Terbalik-transkripsi (RT-PCR) adalah teknik paling sensitif untuk deteksi mRNA dan kuantitasi yang tersedia saat ini. Dibandingkan dengan dua teknik lain yang biasa digunakan untuk mengukur tingkat mRNA, analisis blot utara dan proteksi RNase, RT-PCR dapat digunakan untuk mengukur level mRNA dari sampel yang jauh lebih kecil. Teknologi Real-Time qRT-PCR (Real-Time Quantitative Reverse Transcription PCR) adalah pengembangan besar dari teknologi PCR yang memungkinkan deteksi dan pengukuran produk yang dihasilkan selama setiap siklus proses PCR. Kit QuantiTect Probe RT-PCR memungkinkan kuantifikasi sensitif dari target RNA oleh PCR satu langkah real-time menggunakan probe spesifik-sekuens. Kombinasi hot start dan sistem buffer PCR yang unik dalam master mix siap pakai menjamin qRT-PCR yang sangat sensitif pada setiap alat cycler waktu-nyata tanpa perlu penyesuaian. Probe Eclipse® adalah probe PCR yang digunakan untuk menargetkan sekuens DNA dengan komplementasi. Probe Eclipse® memiliki empat komponen: reporter fluorescen, penyaring, pengikat-lekukan minor, dan oli. Penyandingan pada sekuens target menyebabkan perbedaan fisik antara reporter dan penyaring yang mendukung fluoresensi. Konversi pengujian RT-PCR menjadi RT-qPCR atau real-time RT-PCR memungkinkan skrining skala besar terhadap pasien, yang sangat penting selama keadaan gawat darurat kesehatan masyarakat. Tes ini telah dirancang dengan cepat setelah pemetaan genom SARS-CoV-2 yang memungkinkan desain singkat untuk primer dan probe yang spesifik untuk Covid-19. Kurva lebur yang dihasilkan pada akhir PCR waktu-nyata. Polymerase Chain Reaction bertahap waktu nyata (PCR waktu-nyata, atau qPCR saat digunakan secara kuantitatif) adalah teknik laboratorium biologi molekuler berdasarkan amplifikasi molekul DNA target selama PCR (yaitu, secara real-time) bukan pada akhir. Assay CDC DENV-1-4 Real-Time RT-PCR digunakan dalam rRT-PCR pada Instrument PCR waktu-nyata ABI 7500 Fast Dx Real-Time. Assay CDC DENV -1-4 Real-Time RT-PCR mencakup serangkaian primer oligonukleotida dan probe hidrolisis dua-labeled (Taqman®) untuk deteksi kualitatif in vitro dari DENV serotipe 1, 2, 3 atau 4 dari Probe terutama digunakan dalam qPCR, sementara primer sintetik digunakan di setiap jenis PCR. Perbedaan utama antara probe dan primer adalah bahwa probe digunakan untuk mendeteksi keberadaan fragmen DNA spesifik dalam campuran melalui hibridisasi dengan DNA double-stranded sedangkan primer digunakan dalam inisiasi polimerase. Assay TaqMan PCR waktu-nyata. TaqMan Assay yang telah diprediksi oleh Applied Biosystems terdiri dari primer spesifik-target dan satu atau lebih probe yang dioptimalkan untuk aplikasi spesifik, termasuk ekspresi gen, genotiping SNP, miRNA, deteksi mutasi, dan analisis variasi jumlah salinan. Untuk assay yang telah diprediksi: Luncurkan wizard pencarian assay. Primer dan probe untuk deteksi RT-PCR waktu nyata SARS-CoV-2 dirancang untuk menarget dan mendeteksi gen yang mengkodekan protein RdRp, selubung (E), dan nukleokapsid (N). Skema diagram struktur SARS-CoV-2, organisasi genom, dan gen target untuk deteksi diilustrasikan pada Gambar 7.